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高效液相色谱法（HighPerformanceLiquidChromatography/HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高别离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个要紧分支，以液体为滚动相，采纳高压输液系统，将具备不同极性的简单溶剂或不同比例的混杂溶剂、缓冲液等滚动相泵入装有静止相的色谱柱，在柱内各成份被别离后，投入探测器施行探测，进而完结对试样的解析。
高效液相色谱法已成为化学、医学、产业、农学、商检和法检等学科周围中要紧的别离解析手艺应用。此日,小析姐就来和你说说HPLC熟练流程中时常会碰到的那些题目吧!
压力反常操纵压力的改革偶尔是毛病的前兆。从下表中找出所调查到的情景，并在右边的列表中参考呼应的处分办法。
A.没有压力显示，没有滚动相滚动
起因
处分办法
.电源题目
.接通电源，开机
2.保障丝被烧坏
2.改换保障丝
3.掌握器设定不切确或设定失利
3.a.采纳妥当的设定
b.补葺或改换掌握器
4.柱塞杆折断
4.改换柱塞杆
5.泵头内有空气
5.溶剂脱气、启动泵抽出空气
6.滚动相不够
6.a.补充滚动相
b.改换入口滤头
7.单向阀毁坏
7.改换单向阀
8.漏液
8.拧紧或改换手紧会商
B.滚动相滚动平常，但没有压力显示
起因
处分办法
.仪容毁坏
.改换仪容
2.压力传感器毁坏
2.改换压力传感器
C.压力继续偏高
起因
处分办法
.流速设定太高
.调动流速设定
2.柱前筛板壅塞
2.a.在许可境况下反冲色谱柱
b.改换筛板
c.改换色谱柱
3.滚动呼应用失当或缓冲盐的结晶沉没
3.a.应用妥当的滚动相
b.洗涤色谱柱
4.色谱柱取舍失当
4.取舍妥当的色谱柱
5.进样阀毁坏
5.洗涤或改换进样阀
6.柱温过低
6.升高温度
7.掌握器反常
7.补葺或改换掌握器
8.守护柱壅塞
8.洗涤或改换守护柱
9.在线过滤器壅塞
9.洗涤或改换在线过滤器
D.压力继续偏低
起因
处分办法
.流速设定过低
.调动流速
2.系统漏液
2.断定漏液地方并修理
3.色谱柱取舍失当
3.取舍妥当的色谱柱
4.柱温太高
4.低沉温度
5.掌握器反常
5.修理或改换掌握器
E.压力不停激昂
起因
处分办法
.见列表C
.见列表C
F.压力降为零
起因
处分办法
.见列表A、B
.见列表A、B
G.压力不停降落，但不回零
起因
处分办法
.见列表D
.见列表D
H.压力动摇
起因
处分办法
.泵中有气体
.a.溶剂脱气
b.从泵中撤退气体
2.单向阀毁坏
2.改换单向阀
3.泵密封毁坏
3.改换泵密封
4.脱气不充足
4.a.溶剂脱气
b.改革脱气办法（应用在线脱气法等）
5.系统漏液
5.断定漏液地方并修理
6.应用梯度洗脱
6.由于滚动相粘度的改革引发的压力动摇
漏液时常也许经过拧紧或改换管路会商来处分漏液的题目，但值得留心的是过份拧紧会致使金属会商的漏液和塑料会商的磨损。假若经过轻微拧紧会商不能处分漏液的题目，就一定将会商取下，查验是不是毁坏（譬喻，卡套毁坏、密封表面有杂质）；毁坏的会商应当改换掉。
A.会商处漏液
起因
处分办法
.会商松动
.拧紧
2.会商磨损
2.改换
3.会商过紧
3.a.拧松，再从新拧紧
b.改换
4.会商被浑浊
4.a.拆下洗涤
b.改换
5.部件不般配
5.应用统一品牌的配件
B.泵漏液
起因
处分办法
.单向阀松动
.a.拧紧单向阀（无须拧的过紧）
b.改换单向阀
2.会商松动
2.拧紧会商（无须拧的过紧）
3.混杂器密封毁坏
3.a.改换混杂器密封
b.改换混杂器
4.泵密封毁坏
4.修理或改换泵密封件
5.压力传感器毁坏
5.修理或改换压力传感器
6.脉冲阻尼器毁坏
6.改换脉冲阻尼器
7.比例阀毁坏
7.a.查验隔阂，假若漏液当即改换
b.查验手紧会商，毁坏的当即改换
8.放空阀的毁坏
8.a.拧紧放空阀
b.改换放空阀
C.进样阀漏液
起因
处分办法
.转子密封毁坏
.从新安设或改换进样阀
2.定量环壅塞
2.改换定量环
3.进样口密封松动
3.调动
4.进样针头尺寸不符合
4.应用妥当的进样针
5.废液管中形成虹吸
5.维持废液管高于废液液面
6.废液管壅塞
6.改换或疏通废液管
D.色谱柱漏液
起因
处分办法
.尾端会商松动
.拧紧会商
2.卡套内有填料
2.拆下、洗涤卡套、从新安设
3.筛板厚度不符合
3.应用符合的筛板（参考下表）
※筛板取舍指点
物资粒径
筛板孔径
3-4u
0.5u
5-20u
2u
E.探测器漏液
起因
处分办法
.贯通池垫片毁坏
.a.避免过大的配景压力（压力降）
b.改换垫片
2.贯通池窗粉碎
2.改换窗口
3.手紧会商漏液
3.拧紧或改换
4.废液管壅塞
4.改换废液管
5.贯通池壅塞
5.从新安设或改换
液相色谱图液相色谱系统的很多题目都能在谱图上呼应出来，此中有一些题目也许经过改革设置参数获得处分；而其余的题目一定经过窜改操纵程序来处分。关于色谱柱和滚动相的切确取舍是获得好的色谱图的关键。
A.峰拖尾
起因
处分办法
.筛板壅塞
.a.反冲色谱柱
b.改换入口筛板
c.改换色谱柱
2.色谱柱陷落
2.填充色谱柱
3.搅扰峰
3.a.应用更长的色谱柱
b.改革滚动相或改换色谱柱
4.滚动相pH取舍过错
4.调动pH值。关于碱性化合物，低PH值更有益于获得对称峰
5.样本与填料表面的熔解点产生呼应图
5.a.介入离子对试剂或碱性挥发性粉饰剂
b.改变色谱柱
B.峰前延
起因
处分办法
.柱温低
.抬高柱温
2.样本溶剂取舍不妥当
2.应用滚动相做为样本溶剂
3.样本过载
3.低沉样本含量
4.色谱柱毁坏
4.见A、A2
C.峰分叉
起因
处分办法
.守护柱或解析柱浑浊
.取下守护柱再施行解析。假若须要改换守护柱。假若解析柱壅塞，拆下来洗涤。假若题目仍旧存在，或者是柱子被强保存物资浑浊，应用妥当的更生法子。假若题目仍旧存在，入口或者被壅塞，改换筛板或改换色谱柱。
2.样本溶剂不溶于滚动相
2.改革样本溶剂。假若或者采纳滚动相做为样本溶剂。
D.峰变形
起因
处分办法
.样本过载
.裁减样本载量
E.早出的峰变形
起因
处分办法
.样本溶剂取舍不妥当
.a.裁减进样体积
b.应用低极性样本溶剂
F.早出的峰拖尾水平大于晚出的峰
起因
处分办法
．柱外效应
．a.调动系统相连（应用更短、内径更小的管路）；
b.应用小体积的贯通池；
G.K’补充时，脱尾更严峻
起因
处分办法
.二级保存效应，反相形式
.
a.介入三乙胺（或碱性样本）
b.介入乙酸（或酸性样本）
c.介入盐或缓冲剂（或离子化样本）
d.改换一支撑子
2.二级保存效应，正相形式
2.
a.介入三乙胺（或碱性样本）
b.介入乙酸（或酸性样本）
c.介入水（或多官能团化合物）
d.试用另一种办法
3.二级保存效应，离子对
3.介入三乙胺（或碱性样本）
H.酸性或碱性化合物的峰拖尾
起因
处分办法
.缓冲不符合
a.应用浓度50-00mM的缓冲液
b.应用Pka即是滚动相pH值的缓冲液
I.额外的峰
起因
处分办法
.样本中有其余组份
.平常
2.前一次进样的洗脱峰
2.
a.补充运转时候或梯度斜率
b.升高流速
3.空位或鬼峰
3.
a.查验滚动相是不是纯洁
b.应用滚动相做为样本溶剂
c.裁减进样体积
J.保存时候动摇
起因
处分办法
.温控失当
.调好柱温
2.滚动相组分改革
2.避免改革（挥发、呼应等）
3.色谱柱没有均衡
3.在每一次运转以前予以充实的时候均衡色谱柱
K.保存时候不停改革
起因
处分办法
.流速改革
.从新设定流速
2.泵中有气泡
2.从泵中撤退气泡
3.滚动相取舍不妥当
3.
a.改换符合的滚动相
b.取舍符合的混杂滚动相
L.基线漂移
起因
处分办法
.柱温动摇。（纵使是很小的温度改革都邑引发基线的动摇。时常影响示差探测器、电导探测器、较低智慧度的紫外探测器或别的光电类探测器。）
.掌握好柱子和滚动相的温度，在探测器以前应用热调换器
2.滚动相不匀称。（滚动相前提改革引发的基线漂移大于温度致使的漂移。）
2.应用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和增加剂。滚动相在应用行施行脱气，应用中应用氦气。
3.贯通池被浑浊或有气体
3.用甲醇或其余强极性溶剂洗涤贯通池。若有须要，也许用N的硝酸。（不要用盐酸）
4.探测器出口壅塞。（高压形成贯通池窗口分割，形成噪音基线）
4.掏出壅塞物或改换管子。参考探测器手册改换贯通池窗。
5.滚动相配比失当或流速改革
5.改变配比或流速。为避免这个题目可按时查验滚动相构成及流速。
6.柱均衡慢，非常是滚动相产生改革时
6.用中等强度的溶剂施行洗涤，改变滚动相时，在解析前用0-20倍体积的新滚动相对柱子施行洗涤。
7.滚动相浑浊、蜕变或由下德行溶剂配成。
7.查验滚动相的构成。应用高德行的化学试剂及HPLC级的溶剂。
8.样本中有强保存的物资（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，进而展现出一个渐渐抬高的基线。
8.应用守护柱，若有须要，在进样之偶尔在解析流程中，按时用强溶剂洗涤柱子。
9.应用轮回溶剂，但探测器未调动。
9.从新设定基线。当探测器动力学局限产生改革时，应用新的滚动相。
0.探测器没有设定在最大摄取波益处。
0.将波长调动至最大摄取波益处。
M.基线噪音（法则的）
起因
处分办法
.在滚动相、探测器或泵中有空气。
.滚动相脱气。洗涤系统以撤退探测器或泵中的空气。
2.漏液。
2.见第三部份。查验管路会商是不是松动，泵是不是漏液，是不是有盐析出和不平常的噪音，若有须要，改换泵密封。
3.滚动相混杂不全部。
3.用手动摇使混杂匀称或应用低粘度的溶剂
4.温度影响（柱温太高，探测器未加热）。
4.裁减不同或加之热调换器。
5.在统一条线上有其余电子设置。
5.断开LC、探测器和纪录仪，查验搅扰是不是来自于外部，加以改正。
6.泵震荡。
6.在系统中介入脉冲阻尼器。
N.基线噪音（不法则的）
起因
处分办法
、漏液
.见第三部份。查验会商是不是松动，泵是不是漏液，是不是有盐析出和不平常的噪音。若有须要，改换密封。查验贯通池是不是漏液。
2.滚动相浑浊、蜕变或由低质溶剂配成
2.查验滚动相的构成。
3.滚动相各溶剂不相溶
3.取舍互溶的滚动相
4.探测器/纪录仪电子元件的题目
4.断开探测器和纪录仪的电源，查验并改正。
5.系统内有气泡
5.用强极性溶液洗涤系统
6.探测器内有气泡
6.洗涤探测器，在探测器反面安设配景压力调动器
7.贯通池浑浊（纵使是一些的浑浊物也会形成噪音。）
7.用N的硝酸（不能用磷酸）洗涤贯通池
8.探测器灯能量不够
8.改换灯
9.色谱柱填料散失或壅塞
9.改换色谱柱
0.滚动相混杂不匀称或混杂器处事不平常
0.修理或改换混杂器，在滚动相不走梯度时，倡导不应用泵的混杂安装
O.宽峰
起因
处分办法
.滚动相构成改革
.从新制备新的滚动相
2.滚动相流速过低
2.调动流速
3.漏液（非常是在柱子和探测器之间）
3.见section3。查验会商是不是松动、泵是不是漏液、是不是有盐析出以及不平常的噪音。假若须要改换密封。
4.探测器设定不切确
4.调动设定
5.柱外效应影响
a、柱子过载
b.探测器对反适时候或池体积呼应过大
c.柱子与探测器之间的管路过长或管路内径太大
d.纪录仪响适时候过长
5、
a、小体积进样（譬喻：0μL而不是00μL）以：0或：00的比例稀释样本
b、裁减响适时候或应用更小的贯通池
c、应用内径为0.-0.0的短管路
d、裁减响适时候
6.缓冲液浓度过低
6.补充浓度
7.守护柱浑浊或做废
7.改换守护柱
8.色谱柱浑浊或做废，塔板数较低
8.改换一样表率的色谱柱，假若新柱子也许供给对称的色谱峰，则用强溶剂洗涤旧柱子。
9.柱入口陷落
9.翻开柱入口，填补陷落或改换柱子
0.显露两个或多个未被全部别离的物资的峰
0.取舍别的表率的色谱柱以改良别离功效
.柱温过低
.升高柱温，除非非常境况，温度不宜超出75℃
2.探测器时候常数太大
2.应用较小的时候常数
P.别离度低沉
起因
处分办法
.滚动相浑浊或蜕变（引发保存时候改革）
.从新设置滚动相
2.守护柱或解析柱壅塞
2.去掉守护柱施行解析，假若须要则改换守护柱。假若解析柱壅塞，可施行反冲。假若题目仍旧存在色谱柱或者被强保存的浑浊物毁坏，倡导应用妥当的更生程序。假若题目仍旧存在，入口或者壅塞了，改换入口处的筛板或改换色谱柱。
Q.整个的峰面积都过小
起因
处分办法
.探测器衰减设定太高
.裁减衰减的设定
2.探测器时候常数设定太大
2.设定较小的时候常数
3.进样量太少
3.增猛进样量
4.纪录仪相连失当
4.应用切确的相连
R.整个的峰面积都太大
起因
处分办法
.探测器衰减设定过低
.采纳较大的衰减
2.进样过量
2.裁减进样量
3.纪录仪相连不切确
3.切确相连纪录仪
下列题目在应用进样阀流程中有或者产生A.手动进样阀，转化不灵
起因
处分办法
.转子密封毁坏
.改换或调动转子密封
2.转子太紧
2.调动转子的松紧度
B.手动进样阀，载样困苦
起因
处分办法
.进样阀安设失当
.从新安设
2.定量环壅塞
2.洗涤或改换定量环
3.进样器浑浊
3.洗涤或改换进样器
4.管路壅塞
4.洗涤或改换管路
C.主动进样阀，不能转化
起因
处分办法
.无压力（或电源）
.供给妥当的压力（电源）
2.转子太紧
2.调动转子的松紧度
3.进样阀安设失当
3.从新安设
D.主动进样阀，别的题目
起因
处分办法
.壅塞
.洗涤或改换壅塞部件
2.死板毛病
2.见随机修理手册
3.掌握器毛病
3.修理或改换掌握器
由气息、情景和声响也许觉察的题目你须要应用你整个的感官去觉察液相色谱的题目。你最佳养成习惯，天天花上几分钟应用你的感官（除了味觉）来“感触”你的液相色谱是不是存在题目，云云也许辅助你快速找到题目住址。譬喻，在你看到漏液以前，你或者首先闻到它的气息。大部份的题目是也许经过眼睛看到。
A.溶剂的气息
起因
处分办法
.漏液
.见section3
2.溅出
a.查验废液瓶是不是已满
b.找到溅出的部位并洗涤洁白
B.热气息
起因
处分办法
.仪器过热
a.查验并调动透风设备
b.查验并调动温度设定
c.关掉仪器，搜索修理手册
C.读数不平常
起因
处分办法
.压力不平常
.见section2
2.柱温箱题目
2.
a.查验并调动设定
b.参照用户手册
3.探测器灯做废
3.改换灯
D.灯忠告
起因
处分办法
.压力超出极限值
.
Aa.查验是不是壅塞
b.查验并调动极限值的设定
2.别的启示灯
2.见用户手册
E.忠告音
起因
处分办法
.溶剂泄露/溅出
.找到并处分
2.别的忠告音
2.见用户手册
F.难听的短音或长音
起因
处分办法
.轴承做废
.见用户手册
2.光滑不敷
2.施行妥当的光滑
3.死板毛病
3.见用户手册
罕见毛病及平常维持下表中列出了液相色谱罕见的一些题目，右边中则列出的平常维持的办法也许裁减题目浮现的频次。括号中的数字是倡导施行维持的时候分开。用户手册则供给您更多的维持办法。
A.溶剂瓶
题目
维持
.入口筛板壅塞；
.
a.改换（3-6个月）
ab、b.过滤滚动相，0.5μ滤膜
2.气泡；
2.滚动相脱气；
B.泵
题目
维持
.气泡；
.滚动相脱气；
2.泵密封毁坏；
2.改换（3个月）；
3.单向阀毁坏；
3.过滤滚动相，应用在线过滤，谋划备用单向阀；
C.进样阀
题目
维持
.转子密封毁坏
.
a.不要拧的过紧
b.过滤样本
D.色谱柱
题目
维持
.筛板壅塞
.
a.过滤滚动相
b.过滤样本
c.应用在线过滤或守护柱
2.柱头陷落
2.
a.避免应用pH8的滚动相（针对大部份硅胶的柱子）；
b.应用守护柱；
c.应用预柱（饱和色谱柱）；
E.探测器
题目
维持
.灯做废，探测器呼应低沉，噪音增大
.改换（6个月）或谋划备用灯
2.贯通池有气泡
2.
a.维持贯通池干净
b.池后应用反压抵制器
c.滚动相脱气
F.通常
题目
维持
.侵蚀/磨擦毁坏
.在不使历时维持系统缓冲液的干净
(文章起源：百度文库)
熟练与解析人的
「抱团进修生长」社群
小析姐喊你归！队！啦！
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小析姐
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