流动相通过输液泵流经进样阀，与样品溶液混合，在色谱柱中进行吸附、分离，最后分别经过检测器转变为电讯号，在色谱工作站上出现样品峰。
1.高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统。进样系统,一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。输液系统,该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。
2.色谱柱由柱管、压帽、卡套、筛板滤片、接头、螺灯等组成。柱管多用不锈钢制成，压力不高于70kgf/cm2时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很低的粗糙度。为提高柱效，减小管壁效应，不锈钢柱内壁多经过抛光。也有人在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以降低内壁的粗糙度，其效果与抛光相同。
3.流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。如果将含缓冲液的流动相留在泵内，由于蒸发或泄漏，甚至只是由于溶液的静置，就可能析出盐的微细晶体，这些晶体将和上述固体微粒一样损坏密封环和柱塞等。
