高效液相色谱常见问题与解决方法汇总培优精

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  压力反常

操纵压力的改动偶尔是毛病的征候。从下表中找出所调查到的形势,并在右边的列表中参考反应的办理法子。

A、没有压力显示,没有起伏相起伏

缘故

办理法子

、电源题目

、接通电源,开机

2、保障丝被烧坏

2、调换保障丝

3、操纵器设定不确实或设定失利

3、a、采纳稳当的设定

b、修补或调换操纵器

4、柱塞杆折断

4、调换柱塞杆

5、泵头内有空气

5、溶剂脱气、启动泵抽出空气

6、起伏相不够

6、a、增添起伏相

b、调换入口滤头

7、单向阀毁坏

7、调换单向阀

8、漏液

8、拧紧或调换手紧磋议

B、起伏相起伏寻常,但没有压力显示

缘故

办理法子

、风度毁坏

、调换风度

2、压力传感器毁坏

2、调换压力传感器

C、压力接连偏高

缘故

办理法子

、流速设定太高

、调动流速设定

2、柱前筛板梗塞

2、a、在准许景况下反冲色谱柱

b、调换筛板

c、调换色谱柱

3、起伏相利用不妥或缓冲盐的结晶沉没

3、a、利用稳当的起伏相

b、荡涤色谱柱

4、色谱柱抉择不妥

4、抉择稳当的色谱柱

5、进样阀毁坏

5、荡涤或调换进样阀

6、柱温过低

6、提升温度

7、操纵器反常

7、修补或调换操纵器

8、维持柱堵塞

8、荡涤或调换维持柱

9、在线过滤器堵塞

9、荡涤或调换在线过滤器

D、压力接连偏低

缘故

办理法子

、流速设定过低

、调动流速

2、系统漏液

2、肯定漏液地方并修理

3、色谱柱抉择不妥

3、抉择稳当的色谱柱

4、柱温太高

4、下降温度

5、操纵器反常

5、修理或调换操纵器

E、压力不休高涨

缘故

办理法子

、见列表C

、见列表C

F、压力降为零

缘故

办理法子

、见列表A、B

、见列表A、B

G、压力不休下落,但不回零

缘故

办理法子

、见列表D

、见列表D

H、压力摆荡

缘故

办理法子

、泵中有气体

、a、溶剂脱气

b、从泵中撤退气体

2、单向阀毁坏

2、调换单向阀

3、泵密封毁坏

3、调换泵密封

4、脱气不充足

4、a、溶剂脱气

b、改动脱气法子(利用在线脱气法等)

5、系统漏液

5、肯定漏液地方并修理

6、利用梯度洗脱

6、由于起伏相粘度的改动引发的压力摆荡

2

漏液

时常能够经过拧紧或调换管路磋议来办理漏液的题目。但值得注视的是过份拧紧会致使金属磋议的漏液和塑料磋议的磨损。要是经过略微拧紧磋议不能办理漏液的题目,就务必将磋议取下,审查能否毁坏(比如,卡套毁坏、密封表面有杂质);毁坏的磋议理当调换掉。

A、磋议处漏液

缘故

办理法子

、磋议松动

、拧紧

2、磋议磨损

2、调换

3、磋议过紧

3、a、拧松,再从新拧紧

b、调换

4、磋议被混浊

4、a、拆下荡涤

b、调换

5、部件不般配

5、利用统一品牌的配件

B、泵漏液

缘故

办理法子

、单向阀松动

、a、拧紧单向阀(不用拧的过紧)

b、调换单向阀

2、磋议松动

2、拧紧磋议(不用拧的过紧)

3、搀杂器密封毁坏

3、a、调换搀杂器密封

b、调换搀杂器

4、泵密封毁坏

4、修理或调换泵密封件

5、压力传感器毁坏

5、修理或调换压力传感器

6、脉冲阻尼器毁坏

6、调换脉冲阻尼器

7、比例阀毁坏

7、a、审查隔阂,要是漏液即时调换

b、审查手紧磋议,毁坏的即时调换

8、放空阀的毁坏

8、a、拧紧放空阀

b、调换放空阀

C、进样阀漏液

缘故

办理法子

、转子密封毁坏

、从新安置或调换进样阀

2、定量环堵塞

2、调换定量环

3、进样口密封松动

3、调动

4、进样针头尺寸不适合

4、利用稳当的进样针

5、废液管中形成虹吸

5、维持废液管高于废液液面

6、废液管堵塞

6、调换或疏通废液管

D、色谱柱漏液

缘故

办理法子

、尾端磋议松动

、拧紧磋议

2、卡套内有填料

2、拆下、荡涤卡套、从新安置

3、筛板厚度不适合

3、利用适合的筛板(参考下表)

筛板抉择引导

物资粒径

筛板孔径

3-4u

0.5u

5-20u

2u

E、探测器漏液

缘故

办理法子

、通畅池垫片毁坏

、a、防范过大的靠山压力(压力降)

b、调换垫片

2、通畅池窗破灭

2、调换窗口

3、手紧磋议漏液

3、拧紧或调换

4、废液管堵塞

4、调换废液管

5、通畅池堵塞

5、从新安置或调换

3

液相色谱系统的很多题目都能在谱图上反应出来。个中有一些题目能够经过改动设立参数获得办理;而其余的题目务必经过批改操纵程序来办理。关于色谱柱和起伏相的确实抉择是获得好的色谱图的关键。

A、峰拖尾

缘故

办理法子

、筛板堵塞

、a、反冲色谱柱

b、调换入口筛板

c、调换色谱柱

2、色谱柱陷落

2、填充色谱柱

3、侵犯峰

3、a、利用更长的色谱柱

b、改动起伏相或调换色谱柱

4、起伏相PH抉择差错

4、调动PH值。关于碱性化合物,低PH值更有益于获得对称峰

5、样本与填料表面的熔解点产生反应

5、a、插手离子对试剂或碱性挥发性梳妆剂

b、变动色谱柱

B、峰前延

缘故

办理法子

、柱温低

、抬高柱温

2、样本溶剂抉择不稳当

2、利用起伏相做为样本溶剂

3、样本过载

3、下降样本含量

4、色谱柱毁坏

4、见A、A2

C、峰分叉

缘故

办理法子

、维持柱或解析柱混浊

、取下维持柱再停止解析。要是须要调换维持柱。要是解析柱堵塞,拆下来荡涤。要是题目依然存在,或许是柱子被强保存物资混浊,应用合适的更生办法。要是题目依然存在,入口或许被堵塞,调换筛板或调换色谱柱。

2、样本溶剂不溶于起伏相

2、改动样本溶剂。要是或许采纳起伏相做为样本溶剂。

D、峰变形

缘故

办理法子

、样本过载

、淘汰样本载量

E、早出的峰变形

缘故

办理法子

、样本溶剂抉择不稳当

、a、淘汰进样体积

b、应用低极性样本溶剂

F、早出的峰拖尾水平大于晚出的峰

缘故

办理法子

、柱外效应

、a、调动系统毗邻(利用更短、内径更小的管路)

b、利用小体积的通畅池

G、K’增添时,脱尾更严峻

缘故

办理法子

、二级保存效应,反相形式

、a、插手三乙胺(或碱性样本)

b、插手乙酸(或酸性样本)

c、插手盐或缓冲剂(或离子化样本)

d、调换一支撑子

2、二级保存效应,正相形式

2、a、插手三乙胺(或碱性样本)

b、插手乙酸(或酸性样本)

c、插手水(或多官能团化合物)

d、试用另一种法子

3、二级保存效应,离子对

3、插手三乙胺(或碱性样本)

H、酸性或碱性化合物的峰拖尾

缘故

办理法子

、缓冲不适合

、a、利用浓度50-00mM的缓冲液

b、利用Pka即是起伏相PH值的缓冲液

I、额外的峰

缘故

办理法子

、样本中有其余组份

、寻常

2、前一次进样的洗脱峰

2、a、增添运转光阴或梯度斜率

b、提升流速

3、空位或鬼峰

3、a、审查起伏相能否洁净

b、利用起伏相做为样本溶剂

c、淘汰进样体积

J、保存光阴摆荡

缘故

办理法子

、温控不妥

、调好柱温

2、起伏相组分改动

2、防范改动(挥发、反应等)

3、色谱柱没有均衡

3、在每一次运转以前赐与充分的光阴均衡色谱柱

K、保存光阴不休改动

缘故

办理法子

、流速改动

、从新设定流速

2、泵中有气泡

2、从泵中撤退气泡

3、起伏相抉择不稳当

3、a、调换适合的起伏相

b、抉择适合的搀杂起伏相

L、基线漂移

缘故

办理法子

、柱温摆荡。(尽管是很小的温度改动都邑引发基线的摆荡。时常影响示差探测器、电导探测器、较低敏捷度的紫外探测器或另外光电类探测器。)

、操纵好柱子和起伏相的温度,在探测器以前利用热交流器

2、起伏相不平均。(起伏相前提改动引发的基线漂移大于温度致使的漂移。)

2、利用HPLC级的溶剂,高纯度的盐和增加剂。起伏相在利用行停止脱气,利用中利用氦气。

3、通畅池被混浊或有气体

3、用甲醇或其余强极性溶剂荡涤通畅池。倘有须要,能够用N的硝酸。(不要用盐酸)

4、探测器出口堵塞。(高压形成通畅池窗口破灭,形成噪音基线)

4、掏出堵塞物或调换管子。参考探测器手册调换通畅池窗。

5、起伏相配比不妥或流速改动

5、变动配比或流速。为防范这个题目可按时审查起伏相构成及流速。

6、柱均衡慢,尤其是起伏相产生改动时

6、用中等强度的溶剂停止荡涤,变动起伏相时,在解析前用0-20倍体积的新起伏相对柱子停止荡涤。

7、起伏相混浊、蜕变或由下品格溶剂配成

7、审查起伏相的构成。利用高品格的化学试剂及HPLC级的溶剂

8、样本中有强保存的物资(高K’值)以馒头峰样被洗脱出,进而展现出一个逐渐抬高的基线。

8、利用维持柱,倘有须要,在进样之偶尔在解析历程中,按时用强溶剂荡涤柱子。

9、利用轮回溶剂,但探测器未调动。

9、从新设定基线。当探测器动力学领域产生改动时,利用新的起伏相。

0、探测器没有设定在最大吸取波甜头。

0、将波长调动至最大吸取波甜头

M、基线噪音(规矩的)

缘故

办理法子

、在起伏相、探测器或泵中有空气

、起伏相脱气。荡涤系统以撤退探测器或泵中的空气。

2、漏液

2、见第三部份。审查管路磋议能否松动,泵能否漏液,能否有盐析出和不寻常的噪音。倘有须要,调换泵密封。

3、起伏相搀杂不全面

3、用手摆荡使搀杂平均或利用低粘度的溶剂

4、温度影响(柱温太高,探测器未加热)

4、淘汰不同或加之热交流器

5、在统一条线上有其余电子设立

5、断开LC、探测器和纪录仪,审查侵犯能否来自于外部,加以订正。

6、泵振荡

6、在系统中插手脉冲阻尼器

N、基线噪音(不规矩的)

缘故

办理法子

、漏液

、见第三部份。审查磋议能否松动,泵能否漏液,能否有盐析出和不寻常的噪音。倘有须要,调换密封。审查通畅池能否漏液。

2、起伏相混浊、蜕变或由低质溶剂配成

2、审查起伏相的构成。

3、起伏相各溶剂不相溶

3、抉择互溶的起伏相

4、探测器/纪录仪电子元件的题目

4、断开探测器和纪录仪的电源,审查并订正。

5、系统内有气泡

5、用强极性溶液荡涤系统

6、探测器内有气泡

6、荡涤探测器,在探测器背面安置靠山压力调动器

7、通畅池混浊(尽管是少许的混浊物也会形成噪音。)

7、用N的硝酸(不能用磷酸)荡涤通畅池

8、探测器灯能量不够

8、调换灯

9、色谱柱填料散失或堵塞

9、调换色谱柱

0、起伏相搀杂不平均或搀杂器办事不寻常

0、修理或调换搀杂器,在起伏相不走梯度时,提倡不利用泵的搀杂安设

O、宽峰

缘故

办理法子

、起伏相构成改动

、从新制备新的起伏相

2、起伏相流速过低

2、调动流速

3、漏液(尤其是在柱子和探测器之间)

3、见section3。审查磋议能否松动、泵能否漏液、能否有盐析出以及不寻常的噪音。要是须要调换密封。

4、探测器设定不确实

4、调动设定

5、柱外效应影响

a、柱子过载

b、探测器对反合光阴或池体积反应过大

c、柱子与探测器之间的管路过长或管路内径太大

d、纪录仪响合光阴过长

5、

a、小体积进样(比如:0ul而不是00ul)以:0或:00的比例稀释样本

b、淘汰响合光阴或利用更小的通畅池

c、利用内径为0.-0.0的短管路

d、淘汰响合光阴

6、缓冲液浓度过低

6、增添浓度

7、维持柱混浊或生效

7、调换维持柱

8、色谱柱混浊或生效,塔板数较低

8、调换一样典型的色谱柱。要是新柱子能够供应对称的色谱峰,则用强溶剂荡涤旧柱子。

9、柱入口陷落

9、翻开柱入口,填补陷落或调换柱子

0、显露两个或多个未被全面分别的物资的峰

0、抉择另外典型的色谱柱以改进分别成就

、柱温过低

、提升柱温。除非特别景况,温度不宜超越75℃

2、探测器光阴常数太大

2、利用较小的光阴常数

P、分别度下降

缘故

办理法子

、起伏相混浊或蜕变(引发保存光阴改动)

、从新建设起伏相

2、维持柱或解析柱堵塞

2、去掉维持柱停止解析。要是须要则调换维持柱。要是解析柱堵塞,可停止反冲。要是题目依然存在色谱柱或许被强保存的混浊物毁坏,提倡利用稳当的更生程序。要是题目依然存在,入口或许堵塞了,调换入口处的筛板或调换色谱柱。

Q、一共的峰面积都过小

缘故

办理法子

、探测器衰减设定太高

、淘汰衰减的设定

2、探测器光阴常数设定太大

2、设定较小的光阴常数

3、进样量太少

3、增猛进样量

4、纪录仪毗邻不妥

4、利用确实的毗邻

R、一共的峰面积都太大

缘故

办理法子

、探测器衰减设定过低

、采纳较大的衰减

2、进样过量

2、淘汰进样量

3、纪录仪毗邻不确实

3、确实毗邻纪录仪

4

如下题目在利用进样阀历程中有或许产生。

A、手动进样阀,转嫁不灵

缘故

办理法子

、转子密封毁坏

、调换或调动转子密封

2、转子太紧

2、调动转子的松紧度

B、手动进样阀,载样难题

缘故

办理法子

、进样阀安置不妥

、从新安置

2、定量环堵塞

2、荡涤或调换定量环

3、进样器混浊

3、荡涤或调换进样器

4、管路堵塞

4、荡涤或调换管路

C、主动进样阀,不能转嫁

缘故

办理法子

、无压力(或电源)

、供应稳当的压力(电源)

2、转子太紧

2、调动转子的松紧度

3、进样阀安置不妥

3、从新安置

D、主动进样阀,另外题目

缘故

办理法子

、堵塞

、荡涤或调换堵塞部件

2、机器毛病

2、见随机修理手册

3、操纵器毛病

3、修理或调换操纵器

5由气息、形势和声响能够觉察的题目,你须要应用你一共的感官去觉察液相色谱的题目。你最佳养成习惯,天天花上几分钟应用你的感官(除了味觉)来“感触”你的液相色谱能否存在题目,如许能够协助你敏捷找到题目地址。比如:在你看到漏液以前,你或许首先闻到它的气息。大部份的题目是能够经过眼睛看到。A、溶剂的气息

缘故

办理法子

、漏液

、见section3

2、溅出

2、a、审查废液瓶能否已满

b、找到溅出的部位并荡涤洁净

B、热气息

缘故

办理法子

、仪器过热

、a、审查并调动透风设备

b、审查并调动温度设定

c、关掉仪器,搜索修理手册

C、读数不寻常

缘故

办理法子

、压力不寻常

、见section2

2、柱温箱题目

2、

a、审查并调动设定

b、参照用户手册

3、探测器灯生效

3、调换灯

D、灯忠告

缘故

办理法子

、压力超越极限值

a、审查能否堵塞

b、审查并调动极限值的设定

2、另外启示灯

2、见用户手册

E、忠告音

缘故

办理法子

、溶剂暴露/溅出

、找到并办理

2、另外忠告音

2、见用户手册

F、忤耳的短音或长音

缘故

办理法子

、轴承生效

、见用户手册

2、光滑不敷

2、停止稳当的光滑

3、机器毛病

3、见用户手册

6

罕见毛病及平时维持

下表中列出了液相色谱罕见的一些题目,右边中则列出的平时维持的法子能够淘汰题目涌现的频次。括号中的数字是提倡停止维持的光阴距离。用户手册则供应您更多的维持法子。

溶剂瓶

题目

维持

、入口筛板堵塞

、a、调换(3-6个月)

b、过滤起伏相,0.5u滤膜

2、气泡

2、起伏相脱气

题目

维持

、气泡

、起伏相脱气

2、泵密封毁坏

2、调换(3个月)

3、单向阀毁坏

3、过滤起伏相,应用在线过滤,筹办备用单向阀。

进样阀

题目

维持

、转子密封毁坏

、a、不要拧的过紧

b、过滤样本

色谱柱

题目

维持

、筛板堵塞

、a、过滤起伏相

b、过滤样本

c、应用在线过滤或维持柱

2、柱头陷落

2、a、防范利用PH8的起伏相(针对大部份硅胶的柱子)

b、利用维持柱

c、利用预柱(饱和色谱柱)

探测器

题目

维持

、灯生效,探测器反应下降,噪音增大

、调换(6个月)或筹办备用灯

2、通畅池有气泡

2、a、维持通畅池干净

b、池后利用反压统制器

c、起伏相脱气

个别

题目

维持

、腐化/冲突毁坏

、在不使历时维持系统缓冲液的干净

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