超详细的高效液相色谱常见问题与解决方法汇

1

  压力反常

操纵压力的变动每每是毛病的前兆。从下表中找出所查看到的局面,并在右边的列表中参考反映的办理办法。

A、没有压力显示,没有起伏相起伏

因为

办理办法

1、电源题目

1、接通电源,开机

2、保障丝被烧坏

2、调换保障丝

3、把持器设定不切确或设定失利

3、a、选取妥当的设定

b、培修或调换把持器

4、柱塞杆折断

4、调换柱塞杆

5、泵头内有空气

5、溶剂脱气、启动泵抽出空气

6、起伏相不够

6、a、增加起伏相

b、调换入口滤头

7、单向阀毁坏

7、调换单向阀

8、漏液

8、拧紧或调换手紧接洽

B、起伏相起伏平常,但没有压力显示

因为

办理办法

1、风度毁坏

1、调换风度

2、压力传感器毁坏

2、调换压力传感器

C、压力毗邻偏高

因为

办理办法

1、流速设定太高

1、调换流速设定

2、柱前筛板梗塞

2、a、在准许情景下反冲色谱柱

b、调换筛板

c、调换色谱柱

3、起伏相哄骗欠妥或缓冲盐的结晶积淀

3、a、哄骗妥当的起伏相

b、洗涤色谱柱

4、色谱柱取舍欠妥

4、取舍妥当的色谱柱

5、进样阀毁坏

5、洗涤或调换进样阀

6、柱温过低

6、提升温度

7、把持器反常

7、培修或调换把持器

8、掩护柱梗阻

8、洗涤或调换掩护柱

9、在线过滤器梗阻

9、洗涤或调换在线过滤器

D、压力毗邻偏低

因为

办理办法

1、流速设定过低

1、调换流速

2、系统漏液

2、断定漏液场所并培修

3、色谱柱取舍欠妥

3、取舍妥当的色谱柱

4、柱温太高

4、下降温度

5、把持器反常

5、培修或调换把持器

E、压力继续激昂

因为

办理办法

1、见列表C

1、见列表C

F、压力降为零

因为

办理办法

1、见列表A、B

1、见列表A、B

G、压力继续降落,但不回零

因为

办理办法

1、见列表D

1、见列表D

H、压力摇曳

因为

办理办法

1、泵中有气体

1、a、溶剂脱气

b、从泵中裁撤气体

2、单向阀毁坏

2、调换单向阀

3、泵密封毁坏

3、调换泵密封

4、脱气不充足

4、a、溶剂脱气

b、改革脱气办法(哄骗在线脱气法等)

5、系统漏液

5、断定漏液场所并培修

6、哄骗梯度洗脱

6、由于起伏相粘度的变动引发的压力摇曳

2

漏液

常常能够经过拧紧或调换管路接洽来办理漏液的题目。但值得仔细的是过头拧紧会致使金属接洽的漏液和塑料接洽的磨损。假设经过轻微拧紧接洽不能办理漏液的题目,就必需将接洽取下,反省能否毁坏(譬喻,卡套毁坏、密封表面有杂质);毁坏的接洽理当调换掉。

A、接洽处漏液

因为

办理办法

1、接洽松动

1、拧紧

2、接洽磨损

2、调换

3、接洽过紧

3、a、拧松,再从头拧紧

b、调换

4、接洽被浑浊

4、a、拆下洗涤

b、调换

5、部件不般配

5、哄骗统一品牌的配件

B、泵漏液

因为

办理办法

1、单向阀松动

1、a、拧紧单向阀(无须拧的过紧)

b、调换单向阀

2、接洽松动

2、拧紧接洽(无须拧的过紧)

3、混杂器密封毁坏

3、a、调换混杂器密封

b、调换混杂器

4、泵密封毁坏

4、培修或调换泵密封件

5、压力传感器毁坏

5、培修或调换压力传感器

6、脉冲阻尼器毁坏

6、调换脉冲阻尼器

7、比例阀毁坏

7、a、反省隔阂,假设漏液立刻调换

b、反省手紧接洽,毁坏的立刻调换

8、放空阀的毁坏

8、a、拧紧放空阀

b、调换放空阀

C、进样阀漏液

因为

办理办法

1、转子密封毁坏

1、从头安设或调换进样阀

2、定量环梗阻

2、调换定量环

3、进样口密封松动

3、调换

4、进样针头尺寸不符合

4、哄骗妥当的进样针

5、废液管中形成虹吸

5、维持废液管高于废液液面

6、废液管梗阻

6、调换或疏通废液管

D、色谱柱漏液

因为

办理办法

1、尾端接洽松动

1、拧紧接洽

2、卡套内有填料

2、拆下、洗涤卡套、从头安设

3、筛板厚度不符合

3、哄骗符合的筛板(参考下表)

E、筛板取舍提拔

物资粒径

筛板孔径

3-4u

0.5u

5-20u

2u

F、探测器漏液

因为

办理办法

1、流利池垫片毁坏

1、a、避让过大的配景压力(压力降)

b、调换垫片

2、流利池窗击碎

2、调换窗口

3、手紧接洽漏液

3、拧紧或调换

4、废液管梗阻

4、调换废液管

5、流利池梗阻

5、从头安设或调换

3

液相色谱系统的很多题目都能在谱图上反映出来。个中有一些题目能够经过改革设置参数获得办理;而其余的题目必需经过改动操纵程序来办理。关于色谱柱和起伏相的切确取舍是获得好的色谱图的关键。

A、峰拖尾

因为

办理办法

1、筛板梗阻

1、a、反冲色谱柱

b、调换入口筛板

c、调换色谱柱

2、色谱柱陷落

2、填充色谱柱

3、侵犯峰

3、a、哄骗更长的色谱柱

b、改革起伏相或调换色谱柱

4、起伏相PH取舍过错

4、调换PH值。关于碱性化合物,低PH值更有益于获得对称峰

5、样本与填料表面的融化点产生反映图

5、a、参预离子对试剂或碱性挥发性润饰剂

b、改变色谱柱

B、峰前延

因为

办理办法

1、柱温低

1、抬高柱温

2、样本溶剂取舍不妥当

2、哄骗起伏相做为样本溶剂

3、样本过载

3、下降样本含量

4、色谱柱毁坏

4、见A1、A2

C、峰分叉

因为

办理办法

1、掩护柱或解析柱浑浊

1、取下掩护柱再举行解析。假设须要调换掩护柱。假设解析柱梗阻,拆下来洗涤。假设题目仍旧存在,大概是柱子被强保存物资浑浊,应用合适的更生办法。假设题目仍旧存在,入口大概被梗阻,调换筛板或调换色谱柱。

2、样本溶剂不溶于起伏相

2、改革样本溶剂。假设大概选取起伏相做为样本溶剂。

D、峰变形

因为

办理办法

1、样本过载

1、缩小样本载量

E、早出的峰变形

因为

办理办法

1、样本溶剂取舍不妥当

1、a、缩小进样体积

b、应用低极性样本溶剂

F、早出的峰拖尾水平大于晚出的峰

因为

办理办法

1、柱外效应

1、a、调换系统毗邻(哄骗更短、内径更小的管路)

b、哄骗小体积的流利池

G、K’增加时,脱尾更严峻

因为

办理办法

1、二级保存效应,反相形式

1、a、参预三乙胺(或碱性样本)

b、参预乙酸(或酸性样本)

c、参预盐或缓冲剂(或离子化样本)

d、调换一支撑子

2、二级保存效应,正相形式

2、a、参预三乙胺(或碱性样本)

b、参预乙酸(或酸性样本)

c、参预水(或多官能团化合物)

d、试用另一种办法

3、二级保存效应,离子对

3、参预三乙胺(或碱性样本)

H、酸性或碱性化合物的峰拖尾

因为

办理办法

1、缓冲不符合

1、a、哄骗浓度50-mM的缓冲液

b、哄骗Pka即是起伏相PH值的缓冲液

I、额外的峰

因为

办理办法

1、样本中有其余组份

1、平常

2、前一次进样的洗脱峰

2、a、增加运转时候或梯度斜率

b、提升流速

3、空位或鬼峰

3、a、反省起伏相能否纯洁

b、哄骗起伏相做为样本溶剂

c、缩小进样体积

J、保存时候摇曳

因为

办理办法

1、温控欠妥

1、调好柱温

2、起伏相组分变动

2、避让变动(挥发、反映等)

3、色谱柱没有均衡

3、在每一次运转以前赐与充满的时候均衡色谱柱

K、保存时候继续变动

因为

办理办法

1、流速变动

1、从头设定流速

2、泵中有气泡

2、从泵中裁撤气泡

3、起伏相取舍不妥当

3、a、调换符合的起伏相

b、取舍符合的混杂起伏相

L、基线漂移

因为

办理办法

1、柱温摇曳。(尽管是很小的温度变动城市引发基线的摇曳。常常影响示差探测器、电导探测器、较低敏锐度的紫外探测器或另外光电类探测器。)

1、把持好柱子和起伏相的温度,在探测器以前哄骗热替换器。

2、起伏相不平均。(起伏相前提变动引发的基线漂移大于温度致使的漂移。)

2、哄骗HPLC级的溶剂,高纯度的盐和增加剂。起伏相在哄骗行举行脱气,哄骗中哄骗氦气。

3、流利池被浑浊或有气体。

3、用甲醇或其余强极性溶剂洗涤流利池。若有须要,能够用1N的硝酸。(不要用盐酸)

4、探测器出口梗阻。(高压形成流利池窗口分解,形成噪音基线)

4、掏出梗阻物或调换管子。参考探测器手册调换流利池窗。

5、起伏相配比欠妥或流速变动。

5、改变配比或流速。为避让这个题目可按期反省起伏相构成及流速。

6、柱均衡慢,希奇是起伏相产生变动时。

6、用中等强度的溶剂举行洗涤,改变起伏相时,在解析前用10-20倍体积的新起伏相对柱子举行洗涤。

7、起伏相浑浊、改革或由下德行溶剂配成。

7、反省起伏相的构成。哄骗高德行的化学试剂及HPLC级的溶剂。

8、样本中有强保存的物资(高K’值)以馒头峰样被洗脱出,进而显现出一个渐渐抬高的基线。

8、哄骗掩护柱,若有须要,在进样之偶尔在解析经过中,按期用强溶剂洗涤柱子。

9、哄骗轮回溶剂,但探测器未调换。

9、从头设定基线。当探测器动力学领域产生变动时,哄骗新的起伏相。

10、探测器没有设定在最大摄取波益处。

10、将波长调换至最大摄取波益处。

M、基线噪音(规定的)

因为

办理办法

1、在起伏相、探测器或泵中有空气

1、起伏相脱气。洗涤系统以裁撤探测器或泵中的空气。

2、漏液

2、见第三部份。反省管路接洽能否松动,泵能否漏液,能否有盐析出和不平常的噪音。若有须要,调换泵密封。

3、起伏相混杂不齐全

3、用手摇曳使混杂平均或哄骗低粘度的溶剂。

4、温度影响(柱温太高,探测器未加热)

4、缩小差别或加之热替换器。

5、在统一条线上有其余电子设置

5、断开LC、探测器和纪录仪,反省侵犯能否来自于外部,加以订正。

6、泵振荡

6、在系统中参预脉冲阻尼器。

N、基线噪音(不规定的)

因为

办理办法

1、漏液

1、见第三部份。反省接洽能否松动,泵能否漏液,能否有盐析出和不平常的噪音。若有须要,调换密封。反省流利池能否漏液。

2、起伏相浑浊、改革或由低质溶剂配成

2、反省起伏相的构成。

3、起伏相各溶剂不相溶

3、取舍互溶的起伏相。

4、探测器/纪录仪电子元件的题目

4、断开探测器和纪录仪的电源,反省并订正。

5、系统内有气泡

5、用强极性溶液洗涤系统。

6、探测器内有气泡

6、洗涤探测器,在探测器反面安设配景压力调治器。

7、流利池浑浊(尽管是少许的浑浊物也会形成噪音。)

7、用1N的硝酸(不能用磷酸)洗涤流利池。

8、探测器灯能量不够

8、调换灯。

9、色谱柱填料散失或梗阻

9、调换色谱柱。

10、起伏相混杂不平均或混杂器办事不平常

10、培修或调换混杂器,在起伏相不走梯度时,提倡不哄骗泵的混杂装配。

O、宽峰

因为

办理办法

1、起伏相构成变动

1、从头制备新的起伏相

2、起伏相流速过低

2、调治流速

3、漏液(希奇是在柱子和探测器之间)

3、见section3。反省接洽能否松动、泵能否漏液、能否有盐析出以及不平常的噪音。假设须要调换密封。

4、探测器设定不切确

4、调换设定

5、柱外效应影响

a、柱子过载

b、探测器对反合时候或池体积反映过大

c、柱子与探测器之间的管路过长或管路内径太大

d、纪录仪响合时候过长

5、

a、小体积进样(譬喻:10ul而不是ul)以1:10或1:的比例稀释样本

b、缩小响合时候或哄骗更小的流利池

c、哄骗内径为0.-0.01的短管路

d、缩小响合时候

6、缓冲液浓度过低

6、增加浓度

7、掩护柱浑浊或做废

7、调换掩护柱

8、色谱柱浑浊或做废,塔板数较低

8、调换一样典型的色谱柱。假设新柱子能够供应对称的色谱峰,则用强溶剂洗涤旧柱子。

9、柱入口陷落

9、翻开柱入口,填补陷落或调换柱子。

10、显现两个或多个未被齐全分别的物资的峰

10、取舍另外典型的色谱柱以改良分别成效。

11、柱温过低

11、提升柱温。除非特别情景,温度不宜高出75℃

12、探测器时候常数太大

12、哄骗较小的时候常数。

P、分别度下降

因为

办理办法

1、起伏相浑浊或改革(引发保存时候变动)

1、从头设置起伏相

2、掩护柱或解析柱梗阻

2、去掉掩护柱举行解析。假设须要则调换掩护柱。假设解析柱梗阻,可举行反冲。假设题目仍旧存在色谱柱大概被强保存的浑浊物毁坏,提倡哄骗妥当的更生程序。假设题目仍旧存在,入口大概梗阻了,调换入口处的筛板或调换色谱柱。

Q、一切的峰面积都过小

因为

办理办法

1、探测器衰减设定太高

1、缩小衰减的设定

2、探测器时候常数设定太大

2、设定较小的时候常数

3、进样量太少

3、增猛进样量

4、纪录仪毗邻欠妥

4、哄骗切确的毗邻

R、一切的峰面积都太大

因为

办理办法

1、探测器衰减设定过低

1、选取较大的衰减

2、进样过量

2、缩小进样量

3、纪录仪毗邻不切确

3、切确毗邻纪录仪

4

如下题目在哄骗进样阀经过中有大概产生。

A、手动进样阀,转化不灵

因为

办理办法

1、转子密封毁坏

1、调换或调换转子密封

2、转子太紧

2、调换转子的松紧度

B、手动进样阀,载样坚苦

因为

办理办法

1、进样阀安设欠妥

1、从头安设

2、定量环梗阻

2、洗涤或调换定量环

3、进样器浑浊

3、洗涤或调换进样器

4、管路梗阻

4、洗涤或调换管路

C、主动进样阀,不能转化

因为

办理办法

1、无压力(或电源)

1、供应妥当的压力(电源)

2、转子太紧

2、调换转子的松紧度

3、进样阀安设欠妥

3、从头安设

D、主动进样阀,另外题目

因为

办理办法

1、梗阻

1、洗涤或调换梗阻部件

2、死板毛病

2、见随机培修手册

3、把持器毛病

3、培修或调换把持器

5由气息、形势和声响能够觉察的题目,你须要应用你一切的感官去觉察液相色谱的题目。你最佳养成习惯,天天花上几分钟应用你的感官(除了味觉)来“感到”你的液相色谱能否存在题目,云云能够协助你敏捷找到题目地址。譬喻:在你看到漏液以前,你大概首先闻到它的气息。大部份的题目是能够经过眼睛看到。A、溶剂的气息

因为

办理办法

1、漏液

1、见section3

2、溅出

2、a、反省废液瓶能否已满

b、找到溅出的部位并洗涤洁净

B、热气息

因为

办理办法

1、仪器过热

1、a、反省并调治透风设备

b、反省并调治温度设定

c、关掉仪器,搜索培修手册

C、读数不平常

因为

办理办法

1、压力不平常

1、见section2

2、柱温箱题目

2、

a、反省并调治设定

b、参照用户手册

3、探测器灯做废

3、调换灯

D、灯忠告

因为

办理办法

1、压力高出极限值

1、

a、反省能否梗阻

b、反省并调治极限值的设定

2、另外启示灯

2、见用户手册

E、忠告音

因为

办理办法

1、溶剂泄露/溅出

1、找到并办理

2、另外忠告音

2、见用户手册

F、难听的短音或长音

因为

办理办法

1、轴承做废

1、见用户手册

2、光滑不够

2、举行妥当的光滑

3、死板毛病

3、见用户手册

6

罕见毛病及平常保护

下表中列出了液相色谱罕见的一些题目,右边中则列出的平常保护的办法能够缩小题目呈现的频次。括号中的数字是提倡举行保护的时候隔断。用户手册则供应您更多的保护办法。

溶剂瓶

题目

保护

1、入口筛板梗阻

1、

a、调换(3-6个月)

b、过滤起伏相,0.5u滤膜

2、气泡

2、起伏相脱气

题目

保护

1、气泡

1、起伏相脱气

2、泵密封毁坏

2、调换(3个月)

3、单向阀毁坏

3、过滤起伏相,应用在线过滤,谋划备用单向阀

进样阀

题目

保护

1、转子密封毁坏

a、不要拧的过紧

b、过滤样本

色谱柱

题目

保护

1、筛板梗阻

a、过滤起伏相

b、过滤样本

c、应用在线过滤或掩护柱

2、柱头陷落

a、避让哄骗PH8的起伏相(针对大部份硅胶的柱子)

b、哄骗掩护柱

c、哄骗预柱(饱和色谱柱)

探测器

题目

保护

1、灯做废,探测器反映下降,噪音增大

调换(6个月)或谋划备用灯

2、流利池有气泡

a、维持流利池洁净

b、池后哄骗反压抵制器

c、起伏相脱气

正常

题目

保护

1、侵蚀/争持毁坏

1、在不使历时维持系统缓冲液的洁净

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